Описание: Моноклональное антитело CR55T33 распознает фосфорилированный серин 139 человеческого и мышиного H2AX. H2AX является членом семейства гистонов H2A, которые образуют комплекс с ДНК и другими гистонами, образуя повторяющиеся нуклеосомные единицы, характерные для эукариотического хроматина. Нуклеосомы состоят приблизительно из 147 пар оснований ДНК, обернутых вокруг октамера гистонов, состоящего из двух из четырех гистоновых белков: H2A, H2B, H3 и H4. После индукции повреждения ДНК, такого как двухцепочечные разрывы под воздействием облучения, генотоксические стрессы, ошибки репликации или рекомбинация генов, PI3K-подобные киназы (например, атаксия-телеангиэктазия мутантная (ATM), атаксия-телеангиэктазия, связанная с Rad-3 (ATR), и ДНК-зависимая протеинкиназа (DNA-PK) активируются для фосфорилирования серина 139 в H2AX. Это раннее событие фосфорилирования играет решающую роль в наборе белков, участвующих в репарации ДНК.

Моноклональное антитело CR55T33 распознает одну полосу приблизительно 15 кДа на восстановленных клеточных лизатах из клеток Jurkat, стимулированных этопозидом.

Сообщается о применении: Это антитело CR55T33 было описано для использования во внутриклеточном окрашивании с последующим проточным цитометрическим анализом, вестерн-блоттингом, иммуногистохимическим окрашиванием формалин-фиксированных парафиновых срезов тканей и иммуноцитохимией. (конъюгированное с флуорохромом CR55T33 рекомендуется для использования во внутриклеточной проточной цитометрии).

Протестированные приложения: CR55T33 был протестирован с помощью иммуноцитохимии фиксированных метанолом клеток и с помощью иммуногистохимии тканей человека с использованием извлечения антигена при низком или высоком pH и может использоваться в концентрации 5 мкг/мл. Рекомендуется тщательно титровать антитело для оптимальной производительности в интересующем анализе. Это антитело CR55T33 также было протестировано с помощью внутриклеточного окрашивания и проточного цитометрического анализа стимулированных клеток Jurkat с использованием набора буферов Foxp3/Transcirption Factor ( продукт № 00-5523-00 ) и протокола. Его можно использовать в концентрации 0,03 мкг на тест. Тест определяется как количество (мкг) антитела, которое окрасит образец клеток в конечном объеме 100 мкл. Число клеток должно быть определено эмпирически, но может варьироваться от 10^5 до 10^8 клеток/тест.

Протоколы: Мы рекомендуем протокол B: одноэтапный протокол: внутриклеточные (ядерные) белки. В качестве альтернативы можно использовать протокол C: двухэтапный протокол: фиксация/метанол. Протокол A: двухэтапный протокол: внутриклеточные (цитоплазматические) белки использовать нельзя. Все протоколы можно найти в «Протоколе окрашивания внутриклеточных антигенов для проточной цитометрии», расположенном в разделе «Лучшие протоколы» на вкладке «Ресурсы» в Интернете.

eFluor® 660 является заменой Alexa Fluor® 647. eFluor® 660 излучает на длине волны 659 нм и возбуждается красным лазером (633 нм). Убедитесь, что ваш прибор способен обнаружить этот флуорохром.

Чистота: более 90%, как определено с помощью SDS-PAGE.

Агрегация: менее 10%, как определено с помощью ВЭЖХ.

Фильтрация: 0,2 мкм, фильтрация после производства.