T4 DNA Ligasa катализирует образование фосфодиэфирных связей в присутствии АТФ между двухцепочечными ДНК с 3´ гидроксильным и 5´ фосфатным концами. Уникальный буфер T4 DNA Ligasa оптимизирует лигирование, которое может быть выполнено за 5 минут (1). Одноцепочечные нуклеиновые кислоты не являются субстратами для этого фермента. Доступен технический бюллетень T4 DNA Ligasa.

Применение: клонирование (лигирование тупых или липких концов) (2). Добавление линкеров или адаптеров к ДНК с тупыми концами (2).

Источник: очищено из E. coli œ лизоген NM989.

Тестирование производительности и качества: анализы эндодезоксирибонуклеазы, 3´ и 5´ экзодезоксирибонуклеазы; проверена эффективность лигирования.

Определение единицы: Одна единица катализирует обмен 1 нмоль 32 P-меченого пирофосфата на АТФ за 20 мин. при 37 °C. (Одна единица равна приблизительно 300 единицам лигирования липких концов.)

Условия реакции единицы: 66 мМ Трис-HCl (pH 7,6), 6,6 мМ MgCl 2 , 10 мМ ДТТ, 66 мкМ АТФ, 3,3 мкМ 32 P-меченого пирофосфата и фермент в 0,1 мл в течение 20 мин. при 37 °C.