Набор для экстракции ядерных и цитоплазматических белков Thermo Scientific NE-PER обеспечивает эффективный лизис клеток и экстракцию отдельных цитоплазматических и ядерных фракций белков менее чем за два часа.

Характеристики набора для экстракции ядерных и цитоплазматических белков NE-PER:

• Быстрота — получение ядерных и цитоплазматических фракций растворимых белков менее чем за два часа
• Проверено — набор реагентов NE-PER упоминается в более чем 950 различных публикациях
• Универсальность — ядерный белок из культивируемых клеток или тканей (предназначен только для свежих образцов)
• Масштабируемость — два размера наборов для получения экстрактов из клеток и тканей
• Удобство — простые инструкции не требуют ультрацентрифугирования в градиентах
• Совместимость — использование для последующих анализов, включая вестерн-блоттинг, анализы сдвига в геле, анализы белков, анализы репортерных генов и анализы активности ферментов

Набор NE-PER представляет собой метод экстракции ядерных белков, который включает простой, пошаговый лизис клеток и центрифугирование ядерных и цитоплазматических фракций белков. Единственными необходимыми инструментами являются настольная микроцентрифуга, пробирки и пипетки. Реагенты NE-PER эффективно растворяют и разделяют цитоплазматические и ядерные белки на фракции с минимальным перекрестным загрязнением или вмешательством геномной ДНК и мРНК. После обессоливания или разбавления изолированные белки можно использовать для проведения иммуноанализов и экспериментов по взаимодействию белков, таких как анализы сдвига подвижности (EMSA), коиммунопреципитация (Co-IP) и анализы pull-down.

Существует множество методов выделения ядер и приготовления экстрактов ядерных белков. Большинство методов приготовления ядерных экстрактов представляют собой длительные процессы, требующие механической гомогенизации, циклов замораживания/оттаивания, обширных этапов центрифугирования или диализа, которые могут нарушить целостность ядерных белков. Набор реагентов для экстракции ядер и цитоплазмы NE-PER — это основанный на реагентах протокол, который позволяет проводить поэтапный лизис клеток, отделять цитоплазму от неповрежденных ядер, а затем извлекать ядерные белки из геномной ДНК и мРНК. Этот щадящий процесс занимает менее двух часов и требует только стандартной настольной центрифуги при использовании культивируемых клеток. Более того, как активные ядерные белки, так и цитоплазматические белки могут быть извлечены из одной и той же клеточной культуры или образца ткани.

Из двух миллионов клеток набор обычно дает от 200 до 500 мкг цитоплазматического белка и от 100 до 200 мкг ядерного белка (при концентрации 1 мг/мл). Типичное перекрестное загрязнение между цитозольной и ядерной фракциями составляет около 10%. Метод извлекает в основном растворимые белки из ядра, а не столько белки, связанные в хроматине или интегральные мембранные белки ядерной оболочки. Концентрацию белка в ядерных экстрактах можно легко изменять, изменяя объем реагента для ядерной экстракции (NER), используемого при экстракции, без существенной потери эффективности экстракции. Специфическая экстракция ядерных белков из клеток имеет решающее значение для успеха многих исследований регуляции генов. Хотя существует множество методов выделения ядер и приготовления экстрактов ядерных белков, большинство из них представляют собой длительные процессы, требующие механической гомогенизации, циклов замораживания/оттаивания, обширных этапов центрифугирования или диализа, которые могут нарушить целостность многих хрупких ядерных белков. Набор NE-PER решает эти проблемы, обеспечивая высококачественные концентрированные экстракты ядерного белка для использования в EMSA и других методах анализа.