Наборы Thermo Scientific NAb Protein G Spin Kits удобны для быстрой мелкомасштабной аффинной очистки антител из образцов различных типов. Каждая предварительно заполненная микроцентрифужная спин-колонка иммобилизованной белковой смолы обеспечивает быструю очистку 11–15 мг человеческого IgG из 0,5–2 мл сыворотки или другого образца. В каждый набор включено достаточное количество пробирок для сбора, буферов и оптимизированный протокол для очистки не менее двух образцов антител.

Pierce Protein G Agarose — это высококачественная аффинная смола для очистки антител. Она состоит из рекомбинантного белка G, ковалентно иммобилизованного на высококачественной сшитой 6% агарозе с шариками (CL-6B). Эта конкретная разновидность аффинной смолы обеспечивает наиболее универсальное сочетание хроматографических характеристик для высокоэффективной и высокочистой очистки цельного IgG из образцов сыворотки млекопитающих. Агарозные шарики обладают физическими и химическими свойствами, подходящими для многих систем аффинной очистки.

Характеристики агарозы Pierce Protein G:

• Белок G — иммобилизованный белок G идеально подходит для очистки поликлональных IgG из сыворотки мыши, человека, коровы, козы и овцы, включая изотипы человеческого IgG3 и мышиного IgG1
• Агарозная смола — носитель — сшитая 6% агароза с шариками (CL-6B), самая популярная смола для методов аффинной очистки белков
• Инертная и стабильная — превосходный метод производства иммобилизует белок G с помощью свободных от заряда, устойчивых к выщелачиванию ковалентных связей, что приводит к низкому неспецифическому связыванию и позволяет многократно использовать его без снижения выхода
• Стандартная емкость — агароза Pierce Protein G имеет нормальную загрузку иммобилизованного белка G, обеспечивая связывающую емкость от 11 до 15 мг человеческого IgG/мл смолы

Белок G — это белок бактериальной клеточной стенки, первоначально полученный из группы G Streptococcus , а теперь производимый как рекомбинант в E. coli . Как и белок А, белок G связывается с большинством иммуноглобулинов млекопитающих в основном через их Fc-области. Нативный белок G содержит два сайта связывания иммуноглобулина, а также сайты связывания альбумина и клеточной поверхности. В рекомбинантной форме белка G эти сайты связывания альбумина и клеточной поверхности были устранены для уменьшения неспецифического связывания при очистке иммуноглобулинов. Рекомбинантный белок G имеет массу приблизительно 21,6 кДа, но его кажущийся размер по SDS-PAGE составляет от 31 до 34 кДа. Функция связывания IgG оптимальна при pH 5, но также эффективно происходит в условиях, близких к нейтральным (pH от 7,0 до 7,2).

По сравнению с белком A, белок G связывает более широкий спектр подклассов IgG из сыворотки человека, мыши и крысы. В частности, помимо связывания других изотипов так же хорошо, как белок A, белок G демонстрирует более сильное связывание с человеческим IgG3, мышиным IgG1 и всеми тремя изотипами крысиного IgG. Таким образом, белок G обычно рекомендуется для применений, включающих эти виды и изотипы антител. Что касается других видов, белок G обеспечивает более высокую емкость связывания для IgG от коровы, козы и овцы, но он связывается слабее, чем белок A, с IgG свиньи, морской свинки, собаки и кошки.

Агароза Pierce Protein G готовится с использованием химии связывания AminoLink компании Thermo Scientific, что обеспечивает ряд преимуществ по сравнению с традиционными методами иммобилизации лиганда. Иммобилизация AminoLink приводит к конъюгации между мономерами сахара агарозных гранул и остатками нативного лизина на белке А посредством простых амидных связей. В отличие от типичной иммобилизации цианогенбромидом (CNBr), метод AminoLink не вводит никаких новых химических групп, которые могли бы вызвать нежелательное неспецифическое связывание, и создает стабильную, по существу необратимую связь. Результатом является смола с высокой связывающей способностью, которая сохраняет функциональный иммобилизованный белок G в течение нескольких циклов очистки антител.

Агароза Pierce Protein G эффективна для аффинной очистки IgG из сыворотки и других жидкостей многих видов млекопитающих. Белок G особенно хорошо подходит для использования с мышиными антителами (включая IgG1) в дополнение к большинству изотипов IgG из образцов человека, коз и овец.

Свойства сшитой 6% агарозы с гранулами (CL-6B):
• Поддержка стабильности pH: от 2 до 14 (краткосрочная); 3–13 (долгосрочно)
• Средний размер частиц: от 45 до 165 микрон
• Предел исключения: от 10 000 до 4 000 000 дальтон
• Максимальная объемная скорость потока: прибл. 1 мл/минуту (для колонки диаметром 1 см)
• Максимальная линейная скорость: 30 см в час
• Максимальное давление: менее 25 фунтов на кв. дюйм (1,5 бар), определяемое как максимальный перепад давления в колонке, который может выдержать смола (Примечание: указанное манометрическое давление аппарата для жидкостной хроматографии может измерять общее давление в системе, а не перепад давления в колонке.)

Дополнительные данные о продукте
• Использование связывающих антитела белков для очистки антител