Набор для количественного определения белка Thermo Scientific SILAC (трипсин), DMEM, используется для специфического анализа экспрессии белка методом масс-спектрометрии с использованием мечения стабильными изотопами аминокислот в культуре клеток (SILAC).

Характеристики набора для количественного определения белка SILAC, DMEM, включают:
• Эффективность — до 100% включение метки в белки живых клеток
• Воспроизводимость — минимизирует внутриэкспериментальную вариабельность, вызванную дифференциальной подготовкой образцов
• Гибкость — среда дефицитна как по L-лизину, так и по L-аргинину, что позволяет более полно покрывать протеом с помощью двойной изотопной маркировки аминокислот
• Совместимость — маркирует белки, экспрессируемые в самых разных линиях клеток млекопитающих, адаптированных для роста в среде DMEM, включая HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat и другие
• Высококачественные добавки — тяжелые аминокислоты с чистотой изотопов >99%; Диализованная FBS проверена на стерильность, отсутствие эндотоксинов и совместимость с культурой клеток.

Применение набора для количественного анализа белка SILAC:
• Количественный анализ относительных изменений в содержании белка при различных обработках клеток
• Количественный анализ белков, для которых отсутствуют антитела
• Профилирование экспрессии белка для изучения нормальных и больных клеток
• Идентификация и количественная оценка сотен и тысяч белков в одном эксперименте

SILAC — это мощный метод идентификации и количественной оценки относительных дифференциальных изменений в образцах сложных белков. Этот подход подразумевает метаболическое включение in vivo «тяжелых» 13 C- или 15 N-меченых аминокислот в белки с последующей масс-спектрометрией (МС) для ускоренной и всесторонней идентификации, характеристики и количественной оценки белков.

Поскольку пептиды, меченые тяжелыми и легкими аминокислотами, химически идентичны, они ко-элюируют во время предварительного фракционирования обращенно-фазовой колонки и, следовательно, обнаруживаются одновременно во время анализа МС. Относительные интенсивности пиков нескольких изотопно различных пептидов из каждого белка затем используются для определения среднего изменения в содержании белка в обработанном образце.

Наборы Trypsin SILAC поставляются с 13 C 6 15 N 2 L-лизином-2HCl и 13 C 6 15 N 4L-аргинин-HCl для маркировки и количественного определения пептидов, содержащих лизин и аргинин, из трипсиновых белковых переваров. Каждый набор также включает 2 x 500 мл среды и диализованной сыворотки. В сочетании с продуктами Thermo Scientific для обогащения образцов белков/пептидов наборы SILAC Protein Quantitation также позволяют проводить масс-спектрометрический анализ белков с низким содержанием, таких как белки клеточной поверхности, органеллоспецифичные белки и посттрансляционные модификации белков, такие как фосфорилирование или гликозилирование.