TMB (3,3',5,5' тетраметилбензидин) — это хромаген, который дает синий цвет при окислении перекисью водорода (катализируемом HRP) с основными поглощениями при 370 нм и 652 нм. Затем цвет меняется на желтый (измеренный при 450 нм) при добавлении серной или фосфорной кислоты для остановки реакции. TMB очень чувствителен и быстрее окисляется, чем другие субстраты HRP, что приводит к более быстрому развитию цвета. В отличие от других коммерчески доступных субстратов, эти продукты не содержат ДМФА или ДМСО.

Существует три формулы, которые различаются в первую очередь по своей чувствительности. Медленный TMB имеет промежуточную чувствительность, идеален для кинетических показаний. Чувствительность Turbo TMB сравнима с чувствительностью OPD, используемого примерно в концентрации 1 мг/мл. Ultra TMB-ELISA обеспечивает самое высокое отношение сигнал/шум и чувствительность в пикограммовом диапазоне.

Субстраты Thermo Scientific Pierce 1-Step TMB ELISA определяют активность пероксидазы хрена (HRP), давая синий цвет (Amax = 370 нм и 652 нм), который меняется на желтый (Amax = 450 нм) при добавлении стоп-раствора серной или фосфорной кислоты.