DAPI — флуоресцентный краситель, широко используемый в молекулярной биологии и исследованиях клеточной биологии. DAPI известен своей способностью связываться с ДНК, в частности с малой бороздкой двухцепочечной ДНК. Этот краситель испускает синюю флуоресценцию при возбуждении ультрафиолетовым светом, что позволяет исследователям визуализировать и окрашивать ДНК в различных биологических образцах.

Красители Hoechst — это ДНК-специфичные флуоресцентные красители, которые связываются с малой бороздкой двухцепочечной ДНК. Они испускают синюю флуоресценцию при возбуждении ультрафиолетовым светом. Эти красители широко используются для окрашивания ДНК в различных биологических образцах.

Порошки FluoroPure™ Hoechst и DAPI производятся с использованием строгих процессов очистки для минимизации примесей, которые могут помешать флуоресцентной визуализации. Это гарантирует, что DAPI и Hoechst обеспечивают надежные и последовательные результаты с минимальным фоновым шумом. Чистота реагентов FluoroPure™ делает их особенно подходящими для таких требовательных приложений, как микроскопия сверхвысокого разрешения и визуализация живых клеток, где точная и аккуратная визуализация ДНК имеет решающее значение.

DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол):

DAPI 4',6-диамидино-2-фенилиндол — это синий флуоресцентный зонд, который ярко флуоресцирует при селективном связывании с малой бороздкой двухцепочечной ДНК, где его флуоресценция примерно в 20 раз больше, чем в несвязанном состоянии. Его селективность к ДНК и высокая проницаемость для клеток позволяют эффективно окрашивать ядра с небольшим фоном от цитоплазмы и эффективно контрастировать при окрашивании IHC и пространственной транскриптомике и протеомике тканей. DAPI — это классический ядерный контрокраситель для иммунофлуоресцентной микроскопии, а также важный компонент методов скрининга с высоким содержанием, требующих количественного определения содержания ДНК и сегментации на основе клеток (em/ex 341/452 нм).

DAPI в виде дилактатного порошка лучше растворяется в воде, чем дигидрохлоридная соль, и поэтому является лучшим выбором для приготовления исходных растворов в воде.

Для приготовления 5 мг/мл исходного раствора DAPI (14,3 мМ для дигидрохлорида или 10,9 мМ для дилактата) растворите содержимое одного флакона (10 мг) в 2 мл деионизированной воды (dH2O ) или диметилформамида (ДМФ). Менее растворимый в воде дигидрохлорид DAPI может потребовать некоторого времени для полного растворения в воде, и может потребоваться обработка ультразвуком.

Примечание: Ни один из этих производных DAPI не обладает хорошей растворимостью в PBS для приготовления основного раствора.

Разбавьте исходный раствор DAPI 1:5000 (или 1:1000 для 1 мг/мл DAPI 62248) в сверхчистой воде или PBS (1 мкг/мл DAPI). Отфильтруйте рабочий раствор, чтобы удалить агрегаты красителя, которые могут привести к точечному сигналу.

Hoechst 33342, тригидрохлорид, тригидрат и Hoechst 33258, пентагидрат (бис-бензимид):

Наши красители Hoechst — это известные флуорофоры, широко используемые для окрашивания ДНК как в живых, так и в фиксированных клетках. Благодаря своему исключительному сродству и специфичности к ДНК эти красители служат прекрасными нацеливающими агентами, которые могут быть конъюгированы с различными молекулами, что позволяет им быть привязанными к ДНК.

Красители Hoechst обычно включают Hoechst 33258, Hoechst 33342 и Hoechst 34580. Разработанные немецкой компанией Hoechst AG в начале 1970-х годов, эти бисбензимидные красители с тех пор широко используются для окрашивания ДНК.

Возбужденные УФ-светом, красители Hoechst испускают широкий спектр синего света. При связывании с ДНК их флуоресценция увеличивается примерно в 30 раз, обеспечивая сильное отношение сигнал/шум. Это усиление флуоресценции является результатом подавленной вращательной релаксации и снижения гидратации при связывании ДНК (em/ex 360/460 нм).

Красители Hoechst не интеркалируют, связываясь специфически с малой бороздкой ДНК в областях, богатых A–T. Этот уникальный механизм связывания обеспечивает точное и надежное окрашивание ДНК.

Независимо от того, работаете ли вы с живыми или фиксированными клетками, наши красители Hoechst совместимы с иммуногистохимическими приложениями. Кроме того, связывание Hoechst 33342 с ДНК вызывает минимальную цитотоксичность, гарантируя жизнеспособность ваших клеток.

Хотя все три красителя Hoechst имеют схожие области применения, они обладают небольшими различиями в своих свойствах. Например, Hoechst 33342 значительно более проницаем для клеток из-за добавления липофильной этильной группы, что делает его предпочтительным выбором для окрашивания живых клеток. С другой стороны, Hoechst 34580 с его диметиламиновой группой вместо фенола демонстрирует смещенный максимум излучения при 490 нм по сравнению с 461 нм у Hoechst 33258 и Hoechst 33342.

Hoechst 33258, пентагидрат также известен как бис-бензимид.

Применение флуоресцентных красителей DAPI и Hoechst:

Окрашивание ДНК — обычно используется для окрашивания ДНК в флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии. Он связывается с малой бороздкой двухцепочечной ДНК и испускает синюю флуоресценцию при возбуждении ультрафиолетовым (УФ) светом. Это позволяет исследователям визуализировать и количественно определять ДНК в клетках, тканях и ядрах.
Анализ клеточного цикла — широко используется для анализа клеточного цикла. Окрашивая клетки этим красителем и используя проточную цитометрию или флуоресцентную микроскопию, исследователи могут идентифицировать и количественно оценить различные фазы клеточного цикла, такие как фазы G1, S и G2/M. Этот анализ дает представление о пролиферации клеток, прогрессировании клеточного цикла и аномалиях клеточного цикла.
Ядерная морфология и организация хроматина — изучают ядерную морфологию и организацию хроматина. Визуализируя ДНК внутри ядра, исследователи могут изучать изменения в размере ядра, форме и конденсации хроматина, которые связаны с различными клеточными процессами и состояниями.