Легко различайте клетки, подвергающиеся раннему и позднему апоптозу, с помощью наборов eBioscience и Annexin V Apoptosis Detection для анализа проточной цитометрией. Эти наборы используют конъюгированный с красителем жизнеспособности аннексин V для маркировки фосфатидилсерина (PS), раннего маркера апоптоза, на внеклеточной мембране. На поздней стадии апоптоза, когда целостность клетки теряется, как аннексин V, так и краситель жизнеспособности пересекают и связывают PS на внутренней стороне плазматической мембраны.
Аннексины — это семейство кальций-зависимых фосфолипид-связывающих белков, которые преимущественно связывают фосфатидилсерин (PS). В нормальных физиологических условиях PS преимущественно располагается во внутреннем слое плазматической мембраны. После инициации апоптоза PS теряет свое асимметричное распределение по фосфолипидному бислою и перемещается в листок внеклеточной мембраны, маркируя клетки как мишени фагоцитоза. Оказавшись на внешней поверхности мембраны, PS можно обнаружить с помощью флуоресцентно меченого аннексина V кальций-зависимым образом.

На ранней стадии апоптоза плазматическая мембрана исключает красители жизнеспособности, такие как пропидий иодид (PI), 7-AAD или фиксируемые красители жизнеспособности, такие как eFluor 450. Эти клетки будут окрашиваться аннексином V, но не красителем жизнеспособности, таким образом различая клетки на раннем этапе апоптоза. Однако на поздней стадии апоптоза клеточная мембрана теряет целостность, тем самым позволяя аннексину V также получить доступ к PS внутри клетки. Для отделения этих апоптотических и некротических клеток на поздней стадии (аннексин V, положительный по красителю жизнеспособности) от апоптотических клеток на ранней стадии (аннексин V положительный, отрицательный по красителю жизнеспособности).

Текущие красители жизнеспособности, доступные с наборами eBioscience Annexin V Apoptosis Detection, включают FITC, eFluor 450, аллофикоцианин (APC), фикоэритрин (PE), PE-cyanine7 и биотин.