Полинуклеотидкиназа T4 Thermo Scientific™ (T4 PNK) катализирует перенос гамма-фосфата от АТФ к 5'-ОН группе одно- и двухцепочечных ДНК и РНК, олигонуклеотидов или нуклеозид 3'-монофосфатов (прямая реакция). Реакция обратима. В присутствии АДФ полинуклеотидкиназа T4 проявляет 5'-фосфатазную активность и катализирует обмен фосфатными группами между 5'-P-олигополинуклеотидами и АТФ (реакция обмена). Фермент также является 3'-фосфатазой.

Основные моменты • Активен в буферах
рестриктазы Thermo Scientific, ОТ и ДНК-лигазы T4.

Применение
• Маркировка 5'-концов нуклеиновых кислот для использования в качестве:
-- Зондов для гибридизации
-- Зондов для картирования транскриптов
-- Маркеров для гель-электрофореза
-- Праймеров для секвенирования ДНК
-- Праймеров для ПЦР
• 5'-фосфорилирование олигонуклеотидов, продуктов ПЦР, других ДНК или РНК перед лигированием
• Фосфорилирование праймеров ПЦР
• Определение модификации ДНК с помощью анализа [ 32 P]-после мечения
• Удаление 3'-фосфатных групп

Примечания
• 5'-концы нуклеиновых кислот можно маркировать либо прямой, либо обменной реакцией.
• Полиэтиленгликоль (ПЭГ) и спермидин улучшают скорость и эффективность реакции фосфорилирования. ПЭГ используется в смеси для обменной реакции.
• Поскольку полинуклеотидкиназа Т4 ингибируется ионами аммония, используйте ацетат натрия для осаждения ДНК перед фосфорилированием.