Ambion DNase I (RNase-free) (EC 3.1.21.1) — неспецифическая эндонуклеаза, которая расщепляет двух- и одноцепочечную ДНК и хроматин. Она функционирует путем гидролиза фосфодиэфирных связей, образуя моно- и олигонуклеотиды с 5'-фосфатной и 3'-гидроксильной группами. RNase-free DNase I имеет самую высокую доступную чистоту и рекомендуется для расщепления ДНК в присутствии РНК, когда отсутствие РНКазы имеет решающее значение для сохранения целостности РНК. Например, DNase I часто используется для удаления шаблонной ДНК после транскрипции in vitro и для удаления загрязняющей ДНК в препаратах тотальной РНК (особенно тех, что получены из трансфицированных клеток, которые могут содержать плазмидную ДНК), используемых для анализов защиты рибонуклеазы, сокращения библиотеки кДНК и ОТ-ПЦР. ДНКаза I требует двухвалентных катионов (Mg 2+ и Ca 2+ примерно в 5 мМ и 0,5 мМ соответственно) для максимальной активности и имеет оптимум pH 7,8.

ДНКаза I без РНКазы превосходит конкурентов
В исследовательском отчете в BioTechniques (Matthews et al., 32: 1412-1417, 2002) сравнивалось загрязнение РНКазой в препаратах ДНКазы I от Sigma, Roche, Applied Science, Qiagen и Ambion. Результаты показали, что «... за исключением ДНКазы I без РНКазы Ambion™, целостность кРНК из реакций транскрипции in vitro была нарушена и по-прежнему была загрязнена ДНК. ДНКаза Ambion™ использовалась для остальных экспериментов, требующих переваривания ДНКазой...». ДНКаза I Ambion™ тестируется на загрязнение РНКазой и протеазной активностью. Функциональность определяется путем переваривания геномной ДНК человека с последующей количественной ПЦР в реальном времени для обнаружения непереваренной ДНК.

Определение единицы
Одна единица — это количество фермента, необходимое для полного расщепления 1 мкг ДНК за 10 мин при 37 °C, и эквивалентна 0,04 единицам Кунитца.

Вспомогательные продукты
В качестве альтернативы бычьей ДНКазе I рассмотрите рекомбинантную ДНКазу I (кат. № AM2235). Для получения более активной, солеустойчивой ДНКазы см. продукты TURBO™ DNase (кат. № AM2239 и AM2238).