ПРИМЕЧАНИЕ: R932-25 ранее продавался под номером продукта #46-0284. При повторном заказе используйте #R932-25.

R932-25 обнаруживает 6x His-тег (C-термин) -His-His-His-His-His-COOH. Обнаруживает белки слияния, содержащие это (требует свободной карбоксильной группы для обнаружения (Lindner et al., 1997). Этот продукт содержит достаточно материала для 25 вестерн-блоттинга. Эксперименты с вестерн-блоттингом со 100 нг рекомбинантного контрольного белка Positope™ дали обнаруживаемый сигнал в течение 15 минут с использованием хромогенного субстрата. Контрольный белок Positope™ представляет собой рекомбинантный белок 53 кДа, который содержит семь эпитопных меток, включая His(C-term), HisG, c-myc и V5. Для вестерн-блоттинга не разбавляйте конъюгированное с AP антитело в PBS. Фосфат ингибирует щелочную фосфатазу. Мы рекомендуем разбавлять конъюгированное с AP антитело в трис-буферном физиологическом растворе (TBS), содержащем 0,1% (об./об.) Твин-20 и 1% (м./об.) обезжиренного сухого молока. Если вы используете другой буфер для промывки и блокируя ваши блоты, затем разбавьте, как описано выше, этим буфером. Вы можете использовать другие блокирующие агенты, такие как бычий сывороточный альбумин (БСА) или желатин.

Все AP-конъюгированные антитела были протестированы в процедурах иммуноблоттинга. Наблюдался низкий фоновый уровень. В бактериальных лизатах не наблюдалось перекрестной реактивности.

Целевая информация
Тег 6x His представляет собой синтетический олигопептид, состоящий из 6 последовательных остатков гистидина (HHHHHH). Тег His обычно экспрессируется как тег либо на N-, либо на C-концевых участках рекомбинантных белков, чтобы обеспечить изоляцию или очистку с помощью иммобилизованной металл-аффинной хроматографии. Тегирование эпитопа представляет собой метод, при котором известный эпитоп сливается с рекомбинантным белком с использованием генной инженерии. Выбирая определенную комбинацию эпитопа и рекомбинантного белка, тегирование эпитопа позволяет обнаруживать белки, для которых нет доступных антител. Тегированные эпитопом His белки, которые содержат участок остатков гистидина на карбоксильном или аминоконце, используются для очистки рекомбинантных белков с помощью металлохелатной хроматографии из-за свойств связывания металлов кластерами гистидина на тегированных His белках. Например, сродство мотива гистидин-тега к Ni2+ посредством хелатирования является сильным и достаточно селективным, чтобы обеспечить очистку белка до гомогенности с помощью аффинной хроматографии на адсорбенте Ni2+-NTA. Его тег-специфические антитела используются для облегчения обнаружения или коиммунопреципитации меченых белков.