Набор для синтеза кДНК расширенной микроРНК Applied Biosystems™ TaqMan™ использует универсальную химию обратной транскрипции (ОТ) для подготовки шаблона кДНК для использования с анализами TaqMan™ Advanced miRNA для обнаружения и количественной оценки зрелых микроРНК в биологических образцах.

Характеристики рабочего процесса TaqMan Advanced miRNA включают:

• Чувствительность: высокая чувствительность позволяет количественно определять низкоэкспрессирующие мишени miRNA, особенно в биологических жидкостях, таких как плазма, сыворотка и ткани
• Гибкость: универсальная химия ОТ генерирует универсальные шаблоны кДНК для всех miRNA, присутствующих в образце, что обеспечивает гибкость в дизайне исследования
• Экономия образцов: требуется всего 2 мкл входного образца плазмы/сыворотки и генерируется достаточно кДНК для 600 реакций qPCR (20 мкл) или 1200 реакций qPCR (10 мкл)
• Специфичность: этап лигирования 5' позволяет проводить дискриминацию одной пары оснований по всей последовательности miRNA, включая труднообнаружимые несоответствия на 5'-конце
• Золотой стандарт химии TaqMan: этот набор предназначен для использования с TaqMan™ Advanced miRNA Assays для qPCR, которые используют лидирующий в отрасли конвейер разработки биоинформатических анализов Thermo Fisher Scientific и Система валидации для обеспечения высокой специфичности и минимальной перекрестной реактивности даже для близкородственных семейств miRNA.

Набор TaqMan Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit использует 3' поли-A хвост и 5' лигирование последовательности адаптера для удлинения зрелых miRNA, присутствующих в образце на каждом конце перед обратной транскрипцией. Универсальные праймеры RT распознают универсальные последовательности, присутствующие как на 5', так и на 3' удлиненных концах зрелых miRNA. Все зрелые miRNA в образце подвергаются обратной транскрипции в кДНК.

Чтобы улучшить обнаружение низкоэкспрессирующихся мишеней miRNA, кДНК затем амплифицируется с помощью универсальных праймеров miR-Amp и мастер-микса miR-Amp для равномерного увеличения количества кДНК для каждой мишени, поддерживая относительные дифференциальные уровни экспрессии. В отличие от традиционной предварительной амплификации универсальные праймеры miR-Amp распознают универсальные последовательности, добавленные ко всем зрелым miRNA на 5' и 3' концах, что гарантирует отсутствие смещения амплификации.